临床试验中 siRNA 疗法药物JNJ-73763989 (JNJ-3989)和核苷(酸)类似物(NAs)±CAM-E JNJ-56136379 (JNJ-6379)治疗慢性乙肝患者显示出乙肝病毒血清标志物的大幅度降低。INSIGHT研究（NCT04585789）旨在评估对基于 JNJ-3989 的联合治疗方案有应答的慢乙肝患者肝内和外周的免疫学和病毒学标志物的变化。
INSIGHT是一项 phase 2 期、开放标签、平行分组的多中心研究，在欧洲、北美和大洋洲的9个国家进行。实验对象为乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性且目前未接受治疗（NCT；第1组）或HBeAg阴性使用NA抑制病毒复制（VS）的慢乙肝患者（第2组）。患者接受JNJ-3989 + NA ± JNJ-6379治疗48周。
正在收集成对的经皮肝脏核心活检以及细针抽吸活检（FNABs；各基地的统一方案），以调查乙肝病毒标志物和肝内免疫状态的潜在差异和变化。通过免疫荧光（IF）染色，结合新鲜冷冻组织切片的单细胞数字液滴PCR来评估病毒标志物；通过FNABs的单细胞RNA测序来描述免疫细胞的特征。
研究人员在2023欧洲肝病学会年会（EASL2023）上发表了基于基线活检和两个不同亚组慢乙肝患者的比较分析结果。
基线肝脏样本从24名入选者中的20人收集，每组10人。目前，每组的四个核心肝脏活检的分析已经完成。第1组较第2组参与者的血清病毒标志物水平范围较高，这与第1组较第2组中 HBsAg 阳性和 HBcAg 阳性肝细胞的比例较高相一致（图）。在单独分离的肝细胞中，第1组与第2组相比，第一组cccDNA阳性/HBV RNA阳性细胞的频率更高，第二组 cccDNA阳性/HBV RNA阴性肝细胞的频率更低，这与两组之间肝脏IF和血清病毒标志物的差异相一致。
基线收集的19/20份FNAB样本被成功分析，大约2000个基因/细胞被量化（第1组：n = 9；15828个肝脏常驻细胞；第2组：n = 10；21925个肝脏常驻细胞）。平均来言，每个样本有1988个细胞被分析，从282个到5200个细胞不等。在肝脏CD8+T细胞、粘膜相关不变T细胞（MAIT）和自然杀伤（NK）细胞中，观察到第一组和第二组之间干扰素刺激基因的不同表达。肝内免疫细胞中的一些标志物与外周HBsAg水平相关，包括两组中HBsAg<1000 IU/ml的参与者的MAIT细胞中TNF的过度表达。
综上，研究表示， INSIGHT研究成功地采用了统一的多中心活检采集方法，并在单细胞水平上对肝脏常驻细胞进行了中央样本分析。在基线时，与HBeAg阴性的参与者相比，未接受治疗的 HBeAg 阳性参与者的血清病毒水平较高，通过更高比例的HBsAg、HBcAg和HBV RNA阳性肝细胞反映出来。有趣的是，组间免疫细胞RNA表达的差异不大，有14个基因在MAIT/CD8+T细胞或NK细胞中表达明显不同（与假发现率<10%相关）。