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2) 专利 WO2021129775(抗#CTLA-4# 单克隆抗体其制备方法): 抗体2和抗体1蛋白与FcγRIIIa的结合:
[0328] SA传感器(Fertebio)置于PBS中预湿10分钟备用,将 生物素标记的FcγRIIIa 158V(ACRO Biosystems)、FcγRIIIa 158F(ACRO Biosystems)用pH为6.8的含有0.5%BSA的PBST(以下简称稀释缓冲液)稀释至1μg/mL,将SA传感器在FcγRIIIa 158-Biotin中固化至信号约为0.6nm。将待测抗体2、抗体1用稀释缓冲液稀释至500nM,并以此为起始浓度作2倍梯度稀释,一共准备7个浓度点(500、250、125、62.5、31.25、15.62、7.812nM)。将稀释缓冲液、梯度浓度的药物抗体稀释液、再生缓冲液(pH为8.4的1M MgCl 2)、中和缓冲液(PBST)依次加入96孔板相应列中,运行如下步骤:①Baseline:在稀释缓冲液中检测基线60秒;②Association:在抗体梯度稀释液及样品空白(稀释缓冲液)中结合90秒;③Dissociation:在稀释缓冲液中解离90秒;④Regeneration:在再生缓冲液中再生5秒;⑤Neutralization:在中和缓冲液中中和5秒;⑥Regeneration和Neutralization循环进行3次。
[0329] 用Data Analysis 8.2对数据进行处理分析,样品数据经参比(样品空白)信号扣减后进行拟合,得到亲和常数KD。与FcγRIIIa 158F的亲和力结果统计见表3,与FcγRIIIa 158V的亲和力结果统计见表4,其中抗体2、抗体1与FcγRIIIa 158V的结合解离传感图见图7(0-240s为抗体1与FcγRIIIa 158V的结合解离,270-510s为抗体2与FcγRIIIa 158V的结合解离)。
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